Aumento della produttività della reazione IVT mediante cromatografia HPLC

Jun 15, 2023

Le caratteristiche che trasmettiamo sono:Rok Sekirnik, PhD, responsabile dello sviluppo del processo mRNA/pDNA, BIA Separations, ora una società Sartorius.

Le reazioni di trascrizione in vitro (IVT) vengono normalmente eseguite come processi batch. Considerando la loro base catalitica, è possibile allungare i tempi di reazione e le rese mediante aggiunta continua dei reagenti consumati alla miscela di reazione. Tuttavia, le strategie fed-batch finora riportate sono riuscite a ottenere solo un aumento del 40 – 100% nella produzione di mRNA. Uno dei principali limiti dello sviluppo è stato il basso rendimento dell'analisi per la quantificazione dei precursori di mRNA e NTP; la produttività è tipicamente determinata come misura finale della concentrazione di mRNA.

In questo webinar discuteremo di un metodo analitico basato su HPLC che utilizza un ligando multimodale basato sul ligando a scambio anionico/legame idrogeno (PrimaS) per monitorare la reazione IVT, che consente la quantificazione simultanea di NTP, reagente di copertura, plasmide e mRNA entro 3,5 minuti

Quando applicato al monitoraggio della reazione IVT, un approccio batch con una produttività media di 3-5 mg/mL può essere convertito in fed-batch con una resa di 10-12 mg/mL. Verranno dimostrati due approcci per controllare la reazione IVT, uno focalizzato sulla produttività dell'mRNA non tappato, un altro sulla produttività dell'mRNA tappato, richiedendo quindi un controllo preciso del rapporto NPT:reattivo tappato.

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